Optimización de un bioensayo con Bacillus subtilis para la detección de antibióticos en leche de cabra

Autores UPV
Año
CONGRESO Optimización de un bioensayo con Bacillus subtilis para la detección de antibióticos en leche de cabra

Abstract

Se optimizó un bioensayo para la detección de antibióticos utilizados con gran frecuencia en ganado caprino lechero. Para ello, se propuso un diseño factorial (4x2) que permitiese evaluar el efecto de la concentración de esporas de Bacillus subtilis (Log [E]: 7; 7,4; 7,7 y 7,9) y la concentración de trimetoprim (TMP: 450 y 500 µg/Kg) sobre la especificidad y los límites de detección de antibióticos del método en leche de cabra. Se utilizó medio de cultivo Mueller Hinton (38 g/L) fortificado con glucosa (10 g/L), azul de toluidina (20 mg/Kg) y trifeniltetrazolium (150 mg/Kg). La especificidad del bioensayo se calculó analizando 96 muestras individuales de leche de cabra libres de antibióticos y los límites de detección se obtuvieron mediante el análisis de 12 repeticiones de 8 concentraciones de eritromicina, enrofloxacina y sulfametacina. La especificidad del bioensayo fue elevada (93-97%), correspondiendo el máximo valor alcanzado a las microplacas con 450 µg/Kg de TMP y Log [E]≥7,7. Sin embargo, los mejores límites de detección (LD) se obtuvieron con las microplacas con la menor concentración de esporas (Log [E]=7). La función deseabilidad indica que un bioensayo elaborado con 454 µg/Kg de TMP y 1x107 esporas/mL (Log [E]=7) de B. subtilis, presenta LDs más cercanos a sus respectivos LMRs (enrofloxacina: 170 µg/Kg; eritromicina: 45 µg/Kg y sulfametacina: 204 µg/Kg), con una especificidad adecuada (96%). Así, este bioensayo permite detectar antibióticos utilizados con gran frecuencia en ganado caprino, tales como enrofloxacina, eritromicina y sulfametacina. El uso combinado de un método microbiologico comercial con Geobacillus stearothermophilus y un bioensayo que utiliza B. subtilis, incrementa el espectro de detección de antibióticos y minimiza el riesgo de su presencia en la leche de cabra.