TOOLKIT FOR ADVANCED PROTEIN SURFACE DISPLAY IN SACCHAROMYCES CEREVISIAE

El toolkit para exposición de proteínas en superficie de levadura esta compuesto por tres cepas distintas para una exposición aumentada de proteínas en superficie; y 17 plásmidos que permiten la co-expresión de dos proteínas simultáneamente, la recuperación por tratamiento con proteasas y su purificación posterior mediante cromatografía de afinidad. Las cepas de Saccharomyces Cerevisiae se han generado por reemplazamiento génico del promotor del gen natural de AGA1, de forma que en todos los casos su expresión pasa a estar controlada por un promotor inducible por galactosa. La capacidad de exposición de estas cepas se ha comprobado por citometria de flujo y se ha comprobado que es superior a las existentes hasta la fecha. Los 17 plásmidos, contienen nuevas características que les confieren importantes propiedades. Por un lado, se han introducido auxotrofias que no existían, lo que permite su co-transformación en una única cepa. Además, se han introducido los sitios de reconocimiento para proteasas, TEV y Thrombin lo que permite su liberación de la superficie. Y por último se ha introducido 6 repeticiones de Histidinas en su extremo c-terminal, para su concentración y purificación con cromatografía de afinidad con Ni+.