ANTICUERPOS SINTETICOS DE UN SOLO DOMINIO PARA INHIBIR BETALACTAMASAS

La invención contiene 5 sdAbs B2,B3,B4,B5,B6 con capacidad inhibitoria de actividad beta lactamasa de un amplio rango de gram-negativas. Estos anticuerpos son capaces de inhibir la actividad de la beta-lactamasa en solitario, y tienen propiedades sinérgicas cuando se combinan. Los anticuerpos se han obtenido mediante selecciones seriadas de librerías de sdAbs que se exponen en la superficie de levadura Patente: P202230441. La colección original contiene aproximadamente 10^9 combinaciones de sdAbs que se han generado mediante PCR. Tras las rondas seriadas de selección, se aislaron 200 sdAbs con alta capacidad de unirse al antígeno, los cuales se seleccionaron los que tenían mayor afinidad por el antígeno y además alto poder inhibidor de la actividad beta-lactamasa. Los sdAbs con mayor capacidad de unión al antígeno beta-lactamasa se eligió mediante un ensayo ELISA, donde se ensayaron 200 anticuerpos distintos y su capacidad de unión al antígeno seleccionado. Las proteínas con mayor capacidad de unión al antígeno se han producido por separado en Ecoli y se purificaron por cromatografía. La capacidad inhibidora de la betalactamasas se realizó mediante ensayos colorimétricos de nitrocefina. Este tipo de ensayo proporciona datos cuantitativos que pueden utilizarse para estudios enzimológicos. Los sdAbs aislados tienen constantes de inhibición Ki de entre 2.4 y 5.2 uM, lo que significa que son capaces de inhibir la actividad enzimática de la beta-lactamasas a concentraciones muy pequeñas.