Resumen
Los objetivos generales de esta tesis fueron desarrollar nuevos diluyentes de inseminación artificial (IA) suplementados con un análogo de GnRH y caracterizar el proteoma del semen de conejo.
En el capítulo I, se evaluó la inclusión de un cóctel de inhibidores de proteasas en el diluyente de inseminación (DI) para evitar parte de la actividad proteasa del plasma seminal de conejo. La calidad seminal y la fertilidad no se vieron afectadas por el cóctel. Sin embargo, la prolificidad fue significativamente menor en el grupo experimental en comparación con los grupos de control positivo y negativo (8,2±0,22 vs. 9,3±0,23 y 9,2±0,26 gazapos por parto, respectivamente). De este capítulo, se puede concluir que la adición de una amplia variedad de inhibidores de proteasas en el diluyente de semen de conejo afecta negativamente la tasa de prolificidad y que en el futuro sería aconsejable probar inhibidores específicos de aminopeptidasas (AMIs).
En el capítulo II, suplementamos el DI con AMIs (bestatina y EDTA), y estudiamos su efecto sobre la calidad seminal y el rendimiento reproductivo. La inclusión de AMIs no afectó la calidad seminal, ni la fertilidad (85,3 vs. 88,6%), ni la prolificidad (10,12 vs. 10,51 gazapos por parto) en comparación con el grupo control. Por lo tanto, concluimos que los AMIs se pueden utilizar en los DIs de conejo para inhibir parte de la actividad aminopeptidasa del plasma seminal (PS).
En el capítulo III, probamos nuevos DIs de conejo que contenían AMIs con o sin nanopartículas de quitosano (CS)-sulfato de dextrano (DS) que atrapan el análogo de GnRH. Se estudiaron los siguientes diluyentes: C4 (4 µg de buserelina/coneja en medio control (MC): tris-ácido cítrico-glucosa suplementado con AMIs), C5 (5 µg de buserelina/coneja en MC), Q4 (4 µg de buserelina/coneja en nanopartículas CS-DS en MC) y grupo Q5 (5 µg de buserelina/coneja en nanopartículas CS-DS en MC). La fertilidad fue significativamente menor en el grupo C4 en comparación con los grupos C5, Q5 y Q4 (0,7 frente a 0,85, 0,85 y 0,82, respectivamente). Por el contrario, la prolificidad fue similar en los cuatro grupos experimentales. Por lo tanto, las nanopartículas de CS-DS como transportador de acetato de buserelina permiten reducir la concentración de la hormona en diluyentes con AMIs sin afectar la fertilidad ni la prolificidad. Por ello, la nanoencapsulación parece ser un sistema prometedor para proteger el análogo de GnRH en los diluyentes de IA de conejos.
Por otro lado, el objetivo de los últimos tres capítulos fue caracterizar las proteínas del semen de conejo. En los capítulos IV y V, se estudiaron las proteínas del PS de conejo. Las muestras de semen se recuperaron utilizando 6 machos de cada línea genética (A y R) y seleccionando una muestra heteroespérmica del comienzo, del medio y del final de cada estación y de cada línea (24 muestras en total). En el capítulo IV, utilizamos la técnica de electroforesis en gel de poliacrilamida 1D. Siete bandas proteicas fueron significativamente diferentes entre las líneas genéticas y tres bandas entre las estaciones. En el capítulo V, se sometió el PS a nano LC-MS/MS y se identificaron y cuantificaron 402 proteínas. 23 proteínas se expresaron diferencialmente entre genotipos. Con respecto al efecto de la estación en el proteoma del PS de conejo, los resultados mostraron que no hubo un patrón claro de variación de proteína a lo largo del año.
En el capítulo VI, se caracterizaron las proteínas del espermatozoide de conejo. Se recuperaron 6 muestras espermáticas utilizando 5 machos de cada genotipo y se sometieron a nano LC-MS/MS, identificándose y cuantificándose 487 proteínas. 40 proteínas se expresaron diferencialmente entre genotipos. En conclusión, los resultados de los tres últimos capítulos evidencian que el genotipo está relacionado con una abundancia específica de proteínas del PS y del espermatozoide. Finalmente, se creó la primera base de datos de acceso público del proteoma del semen de conejo.
